腸侵襲性大腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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【市場(chǎng)部】    楊永漢

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1）用3%雙氧水浸泡真空轉(zhuǎn)移儀后，用DEPC水沖洗。
2）用RNAZap擦洗多孔滲水屏同膠屏，用DEPC水沖洗二次。
3）鏈接真空泵同真空轉(zhuǎn)移儀，剪取一蚊適當(dāng)大小嘅膜（膜嘅四邊緣應(yīng)大于膠屏孔口嘅5mm），膜喺Transfer buffer浸濕五分鐘之后，放置喺多孔滲水屏嘅適當(dāng)位。
4）起上膠屏，打上外框，扱上鎖。
5）將膠嘅多余地方切除，切后嘅膠四邊緣要可以打過膠屏窿，并zui低限打過邊緣約2mm，以防止漏氣。
6）將膠小心放置喺膜嘅上面，膜與膠之間唔可以有氣泡。
7）打開真空泵，令壓強(qiáng)維持得喺50~58mbar；即刻將transfer buffer加到膠面同周圍。每隔10min喺膠面加埋1ml transfer buffer，真空轉(zhuǎn)移2個(gè)鐘。
8）轉(zhuǎn)膜后，用鑷子擷住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中細(xì)仔溝洗十秒，抹得甩殘余嘅膠同鹽。
9）用嗍水紙吸取膜上多余嘅液體之后，將膜置于UV交聯(lián)儀中自動(dòng)交聯(lián)。
10）將膠同紫之外，交聯(lián)后嘅膜，喺紫之外，燈下檢測(cè)轉(zhuǎn)移效率。（逃過咁長(zhǎng)嘅紫之外，曝光時(shí)間）
12）將膜喺-20℃保存。
7.探針嘅制備
1）喺1.5ml離心理中配制以下反應(yīng)液：
模板DNA（25 ng）1ul
Random Primer 2ul
滅菌水11ul
總體積：14ul
2）95°C.加熱3分鐘之后，快手放置于冰冷卻5min。
3）喺離心理中按下列順序加以下溶液：
10×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ul
Exo-free Klenow Fragment 1 ul
4）撈勻后（25ul），37°C.下反應(yīng)半個(gè)鐘。短暫離心，有冇收集溶液到理底。
5）65°C.加熱5min令酵素失工作。
8.探針嘅純化同過活性測(cè)定：
1）準(zhǔn)備凝膠：將1g凝膠加30ml嘅DEPC水中，浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹嘅凝膠數(shù)次，以除去可溶解嘅葡聚糖。換用新配制嘅TE（PH7.6）。
2）攞1ml一次過針筒，抹得甩內(nèi)肉推捍，將針筒篤用硅化嘅玻璃纖維塞住，喺針筒中裝填Sephadex G-50凝膠。

いち）用3％に移転儀オキシドール真空後、水で洗い流しDEPC。
に）で洗うRNAZap多孔漏水モニターやプラスチック. DEPC水で洗い流して二度。
さん）接続真空ポンプと真空計(jì)剪取移転、ひとつの適當(dāng)な大きさの膜膜の四週辺はよりプラスチック-オリフィスの5 mm）、膜トランスファーbuffer濡れご分後、置く多孔漏水-適切な位置。
よんしよ）にふたをかぶせてプラスチック.アウトライン、バックル施錠。
ご）は接著剤の余分な部分切除、切った後の接著四エッジがプラスチックパネル穴をし、少なくとも約2 mmを端漏れ防止。
6）接著剤を膜の上に置いておくと、膜と接著剤の間には気泡ができない。
ななしち）を開けて真空ポンプを維持して、圧力ごじゅう～58mbar；はすぐtransfer bufferゴム面と週りに加えて。10minゴム面でごとに加え1ml  transfer buffer、真空移転に時(shí)間。
はち）転?zāi)め?、ピンセットで捕まえる膜は?x MOPSジェルRunning bufferの中でそっと浸し洗浄じゅう秒、殘りの接著剤と塩を取り除く。
9）水用紙で膜に余分な液體を吸収した後、UV交換器の中に膜を置く。
10）は、ゴムと紫外線を交交した膜で、紫外線の下で、移動(dòng)効率を検出する。紫外線露出時(shí)間を避ける
12）膜は- 20℃で保存されます。
7 .針の製備
いち）1.5ml遠(yuǎn)心チューブで調(diào)合する以下の反応液：
DNAテンプレート（25 ng）1ul
ランダムにPrimer 2ul
滅菌水11ul
総體積：14ul
に）95°C加熱さん分後、迅速に置いては5min冷たい。
3）離心管に以下の順序で以下の溶液を追加する。
じゅう×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq / mmol [ a-32P」dCTPごul
Exo-free Klenow Fragmentいちul
よんしよ）混合後（25ul）、37℃で反応さんじゅう分。しばらく心を離すと、溶液を収集して底を置く。
ご）65°C加熱5min酵素を失活。
8 .探知の純化及び比活性測(cè)定：
いち）の準(zhǔn)備ゲル：1 gゲル加入30 mlの水に浸しDEPC、泊まる。DEPC水で洗浄膨張のゲル數(shù)回、溶解除去のグルカン。替えのチームＥ（PH7.6）新配合。
に取っ1ml使い捨て注射器、除去內(nèi)芯ツイ守る、注射器の底で珪化のガラス繊維を、注射に裝填Sephadex G-50ゲル。

1) 用3%雙氧水浸泡真空轉(zhuǎn)移儀后，用DEPC水沖洗。
   2) 用RNAZap擦洗多孔滲水屏和塑膠屏，用DEPC水沖洗二次。
   3) 連接真空泵和真空轉(zhuǎn)移儀，剪取一塊適當(dāng)大小的膜（膜的四邊緣應(yīng)大于塑膠屏孔口的5mm），膜在Transfer buffer浸濕5分鐘后，放置在多孔滲水屏的適當(dāng)位置。
   4) 蓋上塑膠屏，蓋上外框，扣上鎖。
   5) 將膠的多余部分切除，切后的膠四邊緣要能蓋過塑膠屏孔，并至少蓋過邊緣約2mm，以防止漏氣。
   6) 將膠小心放置在膜的上面，膜與膠之間不能有氣泡。
   7) 打開真空泵，使壓強(qiáng)維持在50~58mbar；立即將transfer buffer加到膠面和四周。每隔10min在膠面加上1ml transfer buffer，真空轉(zhuǎn)移2小時(shí)。
   8) 轉(zhuǎn)膜后，用鑷子夾住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中輕輕泡洗10秒，去除殘余的膠和鹽。
   9) 用吸水紙吸取膜上多余的液體后，將膜置于UV交聯(lián)儀中自動(dòng)交聯(lián)。
   10) 將膠和紫外交聯(lián)后的膜，在紫外燈下檢測(cè)轉(zhuǎn)移效率。(避免太長(zhǎng)的紫外曝光時(shí)間)
   12) 將膜在-20℃保存。
7. 探針的制備
   1) 在1.5ml離心管中配制以下反應(yīng)液：
模板DNA(25 ng) 1ul
Random Primer    2ul
滅菌水     11ul
總體積：   14ul
   2) 95°C加熱3分鐘后，迅速放置于冰冷卻5min。
   3) 在離心管中按下列順序加入以下溶液：
10×Buffer     2.5ul
dNTP Mixture   2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP    5 ul
Exo-free Klenow Fragment     1 ul
   4) 混勻后（25ul），37°C下反應(yīng)30分鐘。短暫離心，收集溶液到管底。
   5) 65°C加熱5min使酶失活。
8. 探針的純化及比活性測(cè)定：
   1) 準(zhǔn)備凝膠：將1g凝膠加入30ml的DEPC水中，浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹的凝膠數(shù)次，以除去可溶解的葡聚糖。換用新配制的TE（PH7.6）。
   2) 取1ml一次性注射器，去除內(nèi)芯推捍，將注射器底部用硅化的玻璃纖維塞住，在注射器中裝填 Sephadex G-50凝膠。